आणविक आनुवंशिक अनुसन्धान विधि

अन्वेषण र डीएनए संरचना प्रयोग आणविक आनुवंशिक विधि मा भिन्न पहिचान गर्न। क्रोमोजोम, जीन वा एलील को यस क्षेत्रमा पडताल जो प्रत्येक डीएनए क्षेत्र, लागि, विधिहरू फरक। प्रत्येक आणविक आनुवंशिक विधि अन्तरनिहित केही वा शाही सेना र डीएनए अन्य हेरफेर comprises। प्रयोगशाला अवस्था बाहिर सक्दैन बिना गर्न यी सबै विधिहरू, एक भारी जटिलता द्वारा विशेषता छन्, र कर्मचारी अत्यधिक योग्य हुनुपर्छ। यो काम धेरै चरणमा बाहिर छ।

चरणमा

पहिलो, शाही सेना वा डीएनए नमूनाहरू उत्पादन गर्न। यहाँ, आणविक आनुवंशिक विधि वस्तुतः कुनै पनि सामाग्री लागू गर्न सकिन्छ: रगत, leukocytes को एक थोपा, संस्कृति fibroblasts, mucosa (बेकारी), पनि बाल follicles, - डीएनए कुनै पनि नमूना प्राप्त गर्न सकिन्छ। यसलाई कुनै पनि आणविक आनुवंशिक विधि र आफ्नो विभिन्न विकल्प प्रयोग गर्न उपयुक्त छ र लामो छुट्टयाएर डीएनए स्थिर भण्डारण गरिएको छ छ। यसलाई (जीवित जीव को संलग्नता बिना कृत्रिम मा) कृत्रिम मा polymerase श्रृंखला प्रतिक्रिया सुनिश्चित गर्न मद्दत गर्छ दोस्रो चरण, इच्छित टुकडे (प्रवर्धन) डीएनए को को संग्रह समर्पित छ। फलस्वरूप, यो श्रृंखला प्रतिक्रिया द्वारा चयन गरिएको डीएनए खण्ड वृद्धि गर्छ, र डीएनए बढ्छ पटक को शाब्दिक लाखौं रकम।

को आणविक आनुवंशिक अनुसन्धान विधि मा तेस्रो चरण गुणन डीएनए प्रतिबन्ध (यो खण्डीकरणको क्रमलाई, tearing वा काटन) कल्पित छ। प्रतिबन्ध एक polyacrylamide वा agarose जेल मा electrophoresis द्वारा प्रदर्शन। डीएनए खण्ड अध्ययन को यो आणविक-आनुवंशिक विधि सबैले जेल मा एक निश्चित स्थिति लिन अनुमति दिन्छ। त्यसपछि, यो जेल ethidium bromide संग उपचार छ, डीएनए गर्न बाध्यकारी सक्षम, पराबैंगनी प्रकाश संग irradiation, त्यसपछि यो सम्भव luminescence अंश पालन गर्न छ। आणविक आनुवंशिक निदान विधि वैविध्यपूर्ण र धेरै छन्, तर पहिलो दुई चरणमा सबै साधारण छन्। तर डीएनए टुकडे पहिचान गर्न मा, जेल रंग गर्न सकिँदैन, र धेरै अन्य अवस्थित विधिहरू।

प्रजाति

पत्ता mycobacteria लागि सबैभन्दा प्रत्यक्ष र व्यापक विधिहरू माथि आणविक आनुवंशिक डीएनए सिक्ने विधि समावेश हुन सक्छ। यसको सार छ, रोगजनकों को डीएनए को विशिष्ट टुकडे को स्क्यान श्रृंखला सामाग्री पहिचान गर्न। आणविक आनुवंशिक निदान प्रविधी अझै क्षयरोग जस्ता रोग पहिचान गर्न थप कुशल तरिका छैन। को polymerase श्रृंखला प्रतिक्रिया (PCR) को प्रयोग गरेर, तपाईँले मूल डीएनए, त्यो छ, एक लाख समयमा प्रतिहरू संख्या वृद्धि हुनेछ त्यहाँ प्रवर्धन हुनेछ, र यो परिणाम प्रदर्शन गर्नेछ पक्का हुन सक्छौं। यो विधि को मुख्य लाभ छ नब्बे-पाँच प्रतिशत, भन्दा बढी - यो संवेदनशीलता स्तर धेरै उच्च छ।

यस मामला मा मस्यौदा नमूना विशिष्ट oligonucleotide अनुक्रम एक सय र छ पटक वृद्धि देखाउँछ देखि उपज धेरै प्रतिहरू को प्रभावकारिता मा अनुसन्धान को आणविक-आनुवंशिक विधिहरू बाँकी, शाब्दिक दुगुना। श्वसन प्रणाली को क्षयरोगका को पनि संस्कृति निदान एकदम यसको संवेदनशीलता कम। किन आधुनिक चिकित्सा क्षयरोग को निदान को आणविक आनुवंशिक विधिहरू आधारित छ यो छ। विशेष गरी जब, उच्च antigenic variability को रोगजनकों सामना अन्य तरिका निर्धारण एक वर्णन विधि प्रभावकारी छ धेरै गाह्रो छ - विशेष आवश्यकता पोषक तत्व मिडिया र लामो समय खेती। जीव रसायन र आणविक आनुवंशिक विधिहरू परिणाम धेरै फरक प्रभाव उत्पादन।

क्षयरोग को निदान

क्षयरोग को मार्शल PCR निदान सबैभन्दा सामान्यतः रोग सबै चार प्रकारको विशिष्ट छन् कि ती डीएनए दृश्यहरु प्रयोग गरेर। यो लक्ष्य हासिल गर्न अक्सर यी तत्व अत्यधिक प्रवासी प्रजाति माइकोबैक्टीरियम क्षयरोग र सधैं जीनोम मा उपस्थित धेरै प्रतिहरू चिनारी रूपमा, पत्ता लगाउन भनेर अनुक्रम तत्व (छ-986 छ-6110) छ प्राइमरों प्रयोग गर्नुहोस्। पनि डीएनए निकासी शुद्ध संस्कृति र क्लिनिकल (विरामीहरु को sputum) कुनै पनि अन्य उपयुक्त विधि द्वारा देखि बाहिर गर्न सकिन्छ। को guanidine thiocyanate र सिलिका वाहक डीएनए रूपमा आधारित उदाहरणका लागि, त्यहाँ बूम विधि जहाँ lysis बफर प्रयोग गरिन्छ। हरेक वर्ष वृद्धि गरिब bacteriological फरक, र यसैले नैदानिक व्यवहार मा संगठनको एक पूर्ण बिभिन्न स्तर स्थापित छ कि विरामीहरु को संख्या: डीएनए अध्ययन को आणविक-आनुवंशिक विधि निदान मा एक प्रमुख भूमिका खेल्दै गरिएको छ।

तर, हामी कमियां बिना छैन भनेर स्वीकार गर्नुपर्छ। को PCR विधि अक्सर प्रयोग झूटा-सकारात्मक परिणाम एक विशाल संख्या ल्याउँछ छ, र कारण मात्र प्राविधिक त्रुटिहरू, तर पनि विधि नै सुविधाहरू छ। साथै, पहिचान गरिएको छ जो mycobacteria, को स्वयंसमर्थता निर्धारण गर्न निदान को यो विधि प्रयोग गरेर यसलाई बस असम्भव छ। तर यो बेफाइदा सबैभन्दा महत्त्वपूर्ण छ। PCR निदान को आणविक आनुवंशिक विधिहरू mycobacterial डीएनए को दूषण को जोखिम entail। यस कारण लागि प्रमाणीकरण आवश्यकताहरु PCR प्रयोगशालाहरुमा लागि विशेष हार्ड डिजाइन, तिनीहरू तीन अलग परिसर आवश्यक पर्दछ। PCR प्रविधि यसलाई उपयुक्त उपकरण र उच्च प्रशिक्षित कर्मियों को प्रयोग आवश्यक छ, आधुनिक र धेरै जटिल छ।

bacterioscopy

विश्लेषण को निदान परिणाम अन्य डाटा संग तुलना हुनुपर्छ गर्दा: नैदानिक परीक्षा, radiography, धब्बा माइक्रोस्कोपी, क्रप र पनि विशिष्ट उपचार गर्न प्रतिक्रिया धेरै महत्वपूर्ण छन्। यो श्रृंखला मा, PCR अध्ययन मात्र घटक को छ। bacteriological - सरल र तेज विधिहरू हुन सक्छ प्रारम्भिक निदान मा रोगजनक पत्ता लगाउन।

उज्यालो माइक्रोस्कोप (रङ लगाउन ZIEHL-Neelsen) र फ्लोरोसेन्ट (रंग fluorochromes) त्यहाँ प्रयोग भएको छ। लाभ परिणाम धब्बा गति छ। तर यसको drawback ठीकै कारण कम संवेदनशीलता गर्न सीमित क्षमता मानिन्छ। तर, यो विधि सबैभन्दा आर्थिक र क्षयरोगका विरामीहरु पत्ता लगाउन जमीन रूपमा कसले सिफारिस दिइएको छ। mycobacteria bacteriological विधि को पत्ता लगाउने भविष्यवाणी मूल्य र अनुमानित quantitatively जीवाणु excretion छ। धेरै विश्वस्त क्षयरोग को यो आणविक आनुवंशिक अनुसन्धान विधिहरू सामना गर्न।

संस्कृति

mycobacteria को राम्रो पत्ता लगाउने सांस्कृतिक अध्ययन पहिचान। रोग सामाग्री छरिरहेका यो अन्डा मध्यम मा बनेको छ: Mordovsky, Finn द्वितीय, LJ र जस्तै। कृत्रिम मा औषधि र mycobacteria को एक नम्बर को प्रभावकारिता को अप्रत्यक्ष प्रमाण र आफ्नो colonies गर्न mycobacteria को प्रतिरोध को Benchmarks, अनुसन्धान संस्कृति को लागू विधि भने। धेरै वातावरण मा आयोजित छ रोग सामाग्री को mycobacteria inoculation को अलग प्रतिशत वृद्धि गर्न।

धेरै सांस्कृतिक सहित रोगजनक अनुदान र तरल पदार्थ को आवश्यकता बैठक। यो प्रणाली प्रयोग र स्वचालित मिटरिङ्ग प्रकार VANTES वृद्धि। बाली अप सात आठ सप्ताह लागि गर्मी चालू मा आयोजित हुनुपर्छ। यो समय विकास को कमी संग क्रप नकारात्मक विचार गर्न सकिन्छ। निदान सामाग्री संक्रमित गिनी सुँगुर, टीबी गर्न अत्यन्तै susceptible छन् जो: माइकोबैक्टीरियम क्षयरोग पत्ता लगाउन सबैभन्दा प्रभावकारी तरिका जैविक नमूनाहरू विचार गर्नुहोस्।

केही संख्याले

latent संक्रमण - PCR निदान द्वारा खोलिएको थियो जो अध्ययन को रोचक क्षेत्र, को एम क्षयरोगका अध्ययन थियो। टीबी संक्रमण आधुनिक अवधारणा एक सय मान्छे एम क्षयरोगका सम्पर्कमा थिए बाहिर, नब्बे-सक्छ राम्रो संक्रमित हुन, कि तर केवल तिनीहरूलाई दस सक्रिय रोग विकसित भइरहेको छ हो सुझाव। अरूलाई टीबी प्रतिरक्षा छ, र किनकी अवस्थामा को नब्बे प्रतिशत संक्रमण latent रहनेछ। ढाँचा पत्ता लगाउन यो एक आणविक आनुवंशिक विधि मदत गरेको छ।

Geneticists ती जसको बाली रोग सामाग्री नकारात्मक थिए, र एम क्षयरोग संक्रमित व्यक्तिहरूको असी प्रतिशत, तर रोग को कुनै radiographic manifestations संग बगिरहेको पचास-पाँच प्रतिशत, PCR सकारात्मक प्रतिक्रियाहरू प्राप्त भन्छन्। यो आफ्नो विश्लेषण (माइक्रोस्कोपी र संस्कृति) को परिणाम संग, PCR अध्ययन गरेर जोखिममा विरामीहरु पहिचान गर्न मदत एक आनुवंशिक निदान विधि थिए नकारात्मक छ, र subclinical संक्रमण एम क्षयरोगका उपस्थित थियो।

आधुनिक अनुसन्धान

Griess अभिकर्मक द्वारा परीक्षण mycobacteria को नाइट्रेट reductase गतिविधि: रूसी संघ र bacteriological प्रयोगशालाहरुमा निरपेक्ष एकाग्रता को एक त्वरित विधि प्रयोग गर्नुहोस्। विरोधी टीबी केन्द्र भनेर दबाइ प्रतिरोध निर्धारण गर्न अनुमति दिन्छ एक विधि प्रयोग गर्नुहोस्। तरल मिडिया यो गति, स्वचालित जहाँ mycobacteria को radiometric र फ्लोरोसेन्ट लेखा प्रणाली विकास। दुई हप्ता सम्म - यस्तो विश्लेषण चाँडै गरेको छ।

हाल, नयाँ विधिहरू विकास भइरहेका छन्: mycobacteria को दबाइ प्रतिरोध को जीनोटाइप स्तरमा मापन गरिएको छ। प्रतिरोध जीन को आणविक तंत्र र अध्ययन mycobacteria मा उपस्थिति देखाउँछ। यी जीन केही लागूपदार्थ प्रतिरोध सम्बन्धित छन्। उदाहरणका लागि, kasA जीन, inhA लागि, katG isoniazid, rpoB जीन गर्न प्रतिरोधी - rifampicin 16Sp शाही सेना जीन र rpsL - streptomycin, emb1 - ethambutol, gyrA - एक fluoroquinolone र यति मा।

उत्परिवर्तन

आधुनिक निदान एकदम डीएनए अध्ययन लागि आणविक-आनुवंशिक स्तर विधि वृद्धि र तिनीहरूका सबै स्पेक्ट्रम मा उत्परिवर्तन को ठूलो मात्रा अध्ययन पूरा गर्न दिनुभयो। अब हामी 516, 526 र 531 codons मा सबै भन्दा साधारण उत्परिवर्तन को rpoB जीन, र विभिन्न लागूपदार्थको गर्न प्रतिरोध पहिचान भनेर थाह छ। त्यहाँ मात्र परम्परागत विधिहरू प्रयोग mycobacteria को टाइप लागि विधिहरू एक सम्पूर्ण दायरा छ -, जीव रसायन जैविक र सांस्कृतिक, तर पनि व्यापक आधुनिक आणविक आनुवंशिक प्रविधी प्रयोग। पहिले नै त्यहाँ पर्याप्त छन् र monogenic रोगहरु को खोज को लागि सही निदान विधि प्रदान गर्नुहोस्। तिनीहरूले एक विशेष जीन को सही क्षेत्रमा डीएनए अध्ययन आधारित छन्। यो एक जटिल प्रक्रिया सामान्यतया छ समय खपत र महंगा, तर आणविक आनुवंशिक विश्लेषण प्रदान गरिएको छ कि डाटा, धेरै सही र अन्य सबै विश्लेषण को डाटा भन्दा सूचनात्मक छ।

यो लामो कि डीएनए यसलाई कुनै पनि nucleated कक्षहरू odnakova छ कि जीव को सम्पूर्ण जीवनको लागि परिवर्तन गर्दैन ज्ञात गरिएको छ, र यो सम्भव ontogeny को कुनै पनि मंच मा, शरीर को बिल्कुल सबै कक्षहरूको विश्लेषण लिन बनाउँछ। क्षतिग्रस्त जीन पूर्ण-मात्रा नैदानिक रोग पहिलो लक्षण को उपस्थिति, रूपमा साथै स्वस्थ heterozygous मान्छे अघि पत्ता सकिन्छ, तर जीन मा एक उत्परिवर्तन भएको। आणविक आनुवंशिक वंशानुगत रोग निदान विधि यसको (प्रत्यक्ष दृष्टिकोण, डीएनए-निदान) प्रकट गर्न, साथै मार्कर loci डीएनए (आनुवंशिक बहुरूठेगानाहरु), राम्ररी एक क्षतिग्रस्त जीन (अर्थात्, डीएनए-निदान को अप्रत्यक्ष दृष्टिकोण) संग लिङ्क जो संग परिवार मा रोग को अलगाव विश्लेषण गर्न अनुमति दिन्छ। प्रत्यक्ष वा अप्रत्यक्ष - कुनै पनि डीएनए निदान मानव डीएनए को एक कडाई परिभाषित भाग पहिचान को तरिका आधारित छ।

प्रत्यक्ष विधिहरू

दोषी नही जीन वंशाणुगत रोग, जानिन्छ हुँदा प्रसिद्ध डीएनए निदान को प्रत्यक्ष विधिहरू छन्, र यसको उत्परिवर्तन को प्रकार। उदाहरणका लागि, रोग को संख्या मा एक उपयुक्त प्रत्यक्ष विधिहरू। यो हन्टिङ्गटन गरेको chorea (विस्तार Ctg-दोहोरिन्छ), phenylketonuria (R408W), सिस्टिक फाइब्रोसिस (delF508, प्रमुख परिवर्तन) र जस्तै। प्रत्यक्ष विधि को मुख्य लाभ एक पूर्ण-स्वामित्व निदान शुद्धता छ, र त्यहाँ परिवारको बाँकी एक डीएनए विश्लेषण गर्न कुनै आवश्यकता छ। यदि अनुरूप जीन मा एक उत्परिवर्तन पाइन्छ, यो बिल्कुल बोझ परिवारको बाँकी बंशाणु, जीनोटाइप अठोट को एक निदान अनुमोदन दिन्छ।

प्रत्यक्ष निदान अर्को फाइदा गर्ने रोग बाट मृत्यु नातेदार र आमाबाबुले खराब उत्परिवर्तन एक heterozygous वाहक पहिचान गर्न मानिन्छ। रोग recessive autosomal लागि यो विशेष गरी साँचो हो। प्रत्यक्ष विधिहरू को बेफाइदा पनि उपलब्ध छन्। तिनीहरूलाई लागू गर्न, तपाईं ठीक चिन्ने असामान्य जीन, exon-Intron यसको स्पेक्ट्रम र यसको उत्परिवर्तन को संरचना स्थानीयमा गर्न आवश्यक छ। आज सबै monogenic रोगहरु जस्तै जानकारी प्राप्त गरेका छैनन्। एक र एउटै जीन वंशाणुगत रोग को विकास गराउँछ कि रोग उत्परिवर्तन को एक ठूलो संख्या हुन सक्छ किनभने Informativeness प्रत्यक्ष तरिका, छलफल गर्न सकिँदैन पूरा भयो।

अप्रत्यक्ष विधिहरू

डीएनए निदान मा अप्रत्यक्ष विधिहरू सबै अन्य अवस्थामा, क्षतिग्रस्त जीन पहिचान छ भने chromosomally मात्र प्रयोग गरिन्छ, तर, वा लाइन निदान परिणाम दिन भने गरे (जीन जटिल आणविक संस्था वा ठूलो हदसम्म, धेरै छन् भने यदि यो हुन्छ रोग परिवर्तन)। अप्रत्यक्ष विधिहरू allelic परिवार मा polymorphic मार्कर को अलगाव विश्लेषण प्रदर्शन। एउटै chromosomal क्षेत्र वा लोकस फेला मार्कर राम्ररी रोग जोडिएको छ र विलोपन वा insertions, बिन्दु substitutions, दोहोरिन्छ प्रतिनिधित्व, र आफ्नो polymorphism ब्लक मा कक्षहरू विभिन्न रकम कारण हो।

अप्रत्यक्ष निदान छलफल microsatellite र minisatellite बहुरूठेगानाहरु, व्यापक मानव जीनोम मा वितरण हुन्छ जसको लागि सबैभन्दा सुविधाजनक। मार्कर र जीन बीच आनुवंशिक दूरी गर्न क्षति धेरै ठूलो छैन भने आफ्नो मूल्य, उच्च जानकारी सामग्री व्यक्त गरे। उत्तरार्द्ध मामला मा, अनुमान शुद्धता को polymorphic मार्कर र क्षति बीच recombination फ्रिक्वेन्सी एक ठूलो हदसम्म निर्धारण गरिन्छ। अप्रत्यक्ष निदान विधिहरू पनि विरामीहरु र उत्परिवर्तन को वाहक बीच विश्लेषण जनसंख्या अध्ययन एलील आवृत्तियों को अनिवार्य प्रारम्भिक चरण, प्लस nonequilibrium र आसंजन मार्कर र उत्परिवर्ती alleles को recombination को सम्भावना निर्धारण को आवश्यकता प्रदान गर्नुहोस्।

अन्य विधिहरू

शाही सेना वा डीएनए छोटो खण्डहरूमा, साथै एकल जीन सूक्ष्म अध्ययन अन्तर्गत भिजुएलाइज्ड त्यसैले, आणविक आनुवंशिक निदान द्वारा आवश्यक उत्परिवर्तन पहिचान गर्न, हुन सक्दैन। एक "मानव जीनोम परियोजना", साथै आणविक जेनेटिक्स अन्य अग्रिम छ निकै वंशानुगत रोग को निदान को संभावना विस्तार - दुवै pre- र postnatal। यी विधिहरू प्रारम्भिक पत्ता लगाउने प्रदान गर्न र एक भविष्यवाणी poly- र monogenic रोगहरु, जसको debut वयस्कता मा ठाँउ लिन्छ बनाउन सक्छ। दुर्भाग्यवश, आणविक आनुवंशिक अध्ययन को प्राविधिक सक्षमता गर्न कारण निदान किशोरावस्था र बाल्यकाल मा छ विशेष गरी जब, कहिलेकाहीं उत्तराधिकार को सम्बन्ध मा सेट छन् भनेर नैतिक सीमा बाहिर छन्।

संरचनात्मक र संख्यात्मक chromosomal असामान्यताहरु रोग र क्यान्सर, र धेरै malformations को सबै भन्दा साधारण कारण हुन्छन्। भविष्यमा pregnancies मा प्रजनन जोखिम संग, को पूर्वानुमान आकलन गर्न - Chromosomal aberrations परिवार परामर्श लागि महत्त्वपूर्ण छ, जो, पहिचान गर्न आवश्यक छ। क्रोमोजोम विश्लेषण आनुवंशिक निदान को "सुन मानक" छ, तर यो सीमित छ। मात्र को विधिहरू आणविक आनुवंशिक विश्लेषण किनभने त्यहाँ शास्त्रीय पत्ता लगाउन असम्भव छ भनी सूक्ष्म chromosomal परिवर्तन पहिचान गर्न प्रविधि आधारित फ्लोरोसेन्ट आफ्नो उच्च संवेदनशीलता सक्षम लेबल क्लोनिंग प्रयोग, थप गर्न सक्नुहुन्छ cytogenetic अध्ययन। यी प्रविधी झन् हाम्रो निदान क्षमताहरु विस्तार गर्दै छन्, जब जांच, अपांग विकास, मानसिक मंदता, धेरै अन्य वंशानुगत रोग संग बच्चाहरु।

निष्कर्ष

यो जीन संरचना र ज्ञान को समारोह, variability को प्रकार, कि आणविक जेनेटिक्स को विकास संग जडान देखा पर्यो वंशानुगत रोग पत्ता लगाउन सक्ने क्षमता थिए मानवता लागि धेरै महत्त्वपूर्ण छ। यसको विधिहरू डीएनए अणु को अध्ययन उद्देश्य छन् - र जब यो छ सामान्य र जब यो क्षतिग्रस्त भएको छ। nucleotides (डीएनए) को deoxyribonucleic एसिड दृश्यहरु को तयारी व्यक्तिगत टुकडे पहिचान गर्न नमूनाहरू प्राप्त बाट चरणमा विस्तार। जीनोमिक कक्षहरू देखि टुकडे को, प्रतिबन्ध (tearing) डीएनए, प्रवर्धन (क्लोनिंग), electrophoresis को अलग (agarose जेल आफ्नो बिजुली शुल्क र आणविक वजन अलग)। एक असतत धारी को सतह मा स्थित विशिष्ट टुकडे को पहिचान।

त्यसपछि जो मार्फत क्लोन डीएनए टुकडे वा कृत्रिम रेडियोधर्मी जांच संग प्रत्येक खण्ड संकरण बित्दै कार्यमा विशेष फिल्टर, मा रही प्रत्येक परीक्षण नमूना बराबर हुनेछ जो एक नियन्त्रण छ। तपाईं जांच संग तुलना स्थिति वा लम्बाइ परिवर्तन गर्नुभयो भने, यदि नयाँ खण्ड वा बेपत्ता - यो सबै विश्लेषण जीन को nucleotide अनुक्रम मा पुनर्गठन भइरहेको छ भनेर सुझाव। त्यहाँ आणविक आनुवंशिक अध्ययन को आठ आधारभूत प्रविधी हो: अनुक्रमण (डीएनए अनुक्रम को सङ्कल्प), polymerase श्रृंखला प्रतिक्रिया (दृश्यहरु को संख्या मा वृद्धि), प्राइमरों ज्ञात जीन को तैयारी, डीएनए क्लोनिंग, पुनःसंयोजक अणुहरुलाई उत्पादन उत्पन्न प्रोटीन पुनःसंयोजक अणु कारण, पूर्ण सेट सिर्जना (संग्रह पुस्तकालय) क्लोन प्रतिबन्ध प्रयोग गरेर प्राप्त गरेका थिए टुकडे।